季节交替之际，流感总是来势汹汹，感染轻症者流涕、发热、头痛；重症者引发下呼吸道感染如肺炎等甚至有生命危险，给大人孩童带来无尽困扰。呼吸道感染病原体众多，如何快速准确地辨别所感染的病原体，快速有效的对症用药可以起到事半功倍的效果。今天，就带大家了解一下目前临床上正在应用的呼吸道感染病原体检测技术。

呼吸道感染（respiratory tract infection，RTI）约80%的RTI是由病毒引起，不同病原体感染可以表现为相似的症状和影像改变，而同一种病原体感染的症状和影像改变又存在异质性，所以呼吸道感染诊断非常困难。呼吸道感染按部位可分为上呼吸道感染和下呼吸道感染。那么，引起呼吸道感染的病原体主要有哪些呢？上呼吸道感染约70-80％由病毒引起，包括鼻病毒、冠状病毒（包括新型冠状病毒COVID19）、腺病毒、流感和副流感病毒（含甲型、乙型流感病毒）、呼吸道合胞病毒、埃可病毒、柯萨奇病毒等，另有20-30％由细菌引起。下呼吸道感染主要是由细菌、病毒、支原体、衣原体、军团菌等微生物感染引起。细菌感染常继发于病毒感染之后，随着临床上抗感染治疗药物日益增多，耐药菌株同样增多，病毒变异种类屡见不鲜，所以快速准确地确定引起感染的病原体，并选择有效的抗生素或抗病毒药物，才能一招制敌。

据美国疾病预防与控制中心的一项针对儿童社区获得性肺炎（community acquired pneumonia，CAP）的监测研究显示，病毒感染最为常见，约占70%。常见的病毒依次为呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、人鼻病毒（human rhinovirus，HRV）、人偏肺病毒（human metapneumovirus，HMPV）、流感病毒（influenza virus，IV）、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）、腺病毒（adenoviruses，ADV）和EB病毒（EB virus，EBV）等。合格的临床样本是呼吸道感染病原体准确检测的关键因素，应结合感染病原体分布特征和检测方法选择合适的临床标本，尽可能采集多种类型或连续多个时间点采集样本，以提高检测灵敏度。呼吸道病毒感染建议采集鼻咽吸取物或鼻咽拭子进行检测，但鼻咽部样本检出病原体能否真正代表呼吸道感染的病原体尚存争论。

目前我们检验科有多种方法可用于呼吸道感染病原体检测。包括对呼吸道样本进行的检测，如染色镜检、培养、抗原检测、核酸检测等。也包括对非呼吸道样本进行检测，例如尿抗原检测，血清抗体检测和血培养等。

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染色镜检

染色镜检主要用于细菌和真菌感染诊断，特殊染色技术的应用能显著提高显微镜检查的敏感性，如六胺银染色有助于检出肺孢子菌，荧光染色可提高真菌和结核分枝杆菌镜检阳性率。

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病原体体外培养

病原体培养被认为是诊断呼吸道感染的“金标准”。但因病毒培养操作复杂、周期长，临床实验室不能常规开展，所以目前培养技术主要适用于细菌、支原体、衣原体和真菌感染的诊断。

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抗原检测

抗原检测是利用特异性抗体检测呼吸道样本中潜在的病原体抗原，是一种较好的诊断策略。目前国内已有组合检测7种呼吸道感染常见病毒［RSV、ADV、流感病毒A（influenza A virus，IAV）、流感病毒B（influenza B virus，IBV）、PIV 1、2、3型］的免疫荧光试剂盒，也有检查IAV、IBV和RSV的免疫层析试剂盒。这些商品化试剂盒使用方便、快速、特异度高，主要缺点是敏感度较低。若需要提高检测敏感度，可尽量在发病48~72 h内采集临床样本，且采集到丰富的上皮细胞进行检测。

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聚合酶链反应检测病原体核酸

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）检测病原体核酸，核酸检测有较高的灵敏性和特异性，受抗菌药物应用影响小，检测窗口期短，速度快，尤其适用于传染性病原体如病毒（如新型冠状病毒）的核酸筛查，或难以培养的细菌（如结核分枝杆菌）和非典型病原体的检测。另外，现阶段基于分子的床旁检测技术（POCT）快速发展，如环介导等温扩增核酸检测技术（LAMP）对环境和人员要求较低，简单易操作，且检测准确度及灵敏度较高，非常适用于基层或发热门诊等环境。

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多重PCR技术和微流控芯片技术

单靶向核酸检测1次试验仅能检测1种病原体，工作量大，费时长，诊断效率低，可能延误诊断。随着多重PCR技术（multiplex PCR，mPCR）和微流控芯片技术的发展和应用，呼吸道多种病原体核酸联合检测快速兴起。其检测1份标本一次试验可以诊断或排除多种病原体，显著提高了诊断效率。并且检测仪器多为一体化设计，提高了生物安全性，操作简单，可以样本随到随做，显著缩短样本周转时间，自动完成从“样本进”到“结果出”的全过程，使技术更能普及到基层医院。如一款13联病原体核酸试剂盒，检测的病原体包括：甲型流感病毒(InfA)、腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、鼻病毒(HRV)、甲型流感病毒 H1N1（2009）型(09H1)、衣原体(Ch)、副流感病毒(HPIV)、偏肺病毒(HMPV)、肺炎支原体(Mp)、乙型流感病毒(InfB)、季节性流感 H3N2 病毒（H3）、呼吸道合胞病毒(HRSV)、冠状病毒(HCOV)。其全面涵盖多种常见呼吸道病原体，一次采样完成 13 种病原体的检测，极大降低漏检的概率。采用毛细管电泳平台，三重质控，高灵敏性，高特异性。并且当天取样，当日或次日出报告。

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宏基因组测序

宏基因组测序（metagenome next-generation sequencing，mNGS）在感染性疾病病原学诊断中的应用原理是通过对特定样本中所有核酸进行高通量测序，将所获得的序列信息与已知的微生物数据库比对，分析出临床样本中的病原体谱和丰度。mNGS与传统检测技术比较，无需根据预先经验选择培养基、抗原、抗体或引物，能无偏倚检测各种病原体；可检测已知病原体，也可检出未知的新发病原体。但由于mNGS操作程序复杂，目前尚不能实现全程自动化，对环境和人员要求较高，难以在基层实验室开展。此外，受检测成本高、收费贵等因素影响，mNGS尚不能作为常规检测项目，主要用于重症感染、难以治愈的慢性感染、复杂/混合感染等。

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血清抗体检测

目前临床常用的呼吸道相关病原体抗体检测有：嗜肺军团菌1型、肺炎支原体、肺炎衣原体、贝纳特立克次体、ADV、RSV、IAV、IBV及PIV 1、2和3型等抗体。单份血清样本IgM阳性提示可能有现症感染，血清特异性IgG抗体由阴性转为阳性或抗体滴度恢复期较急性期4倍及以上升高有诊断价值。但由于抗体产生有滞后性，该检测易出现假阴性。目前国内也有很多医院检验科开展了九项呼吸道病原体IgM抗体联合检测的项目，包括嗜肺军团菌血清1型IgM抗体+肺炎支原体IgM抗体+Q 热立克次体IgM抗体+肺炎衣原体IgM抗体+腺病毒 IgM 抗体+呼吸道合胞病毒IgM抗体+甲型流感病毒IgM抗体+乙型流感病毒IgM抗体+副流感病毒1、2和1型IgM抗体。该试剂盒采用间接免疫荧光法检测九项病原体的IgM抗体。由于机体受到抗原刺激后最早产生的抗体是IgM，但是IgM的半衰期短（约5天）若血清中特异性IgM类抗体含量增高，表明有近期感染，再在荧光显微镜下得到证明，对感染性疾病的早期诊断有极大帮助。

目前，全球呼吸道感染形势依然严峻。呼吸道感染的临床表现复杂，如何对致病性病原体进行早期、快速、特异性检测显得尤为重要。针对常见病原体的核酸多联检产品同时兼具高灵敏度和强特异性优势，并且快速便捷、一次检测多种病原体，切实满足了临床精准高效诊断的需求。